洁净室的验收--微生物测定

空气中悬浮微生物的测定方法有空气悬浮微生物法和沉降微生物法两种，也即通常所说的浮游菌和沉降菌检测法。浮游菌检测法是利用采样器收集悬浮在空气中的微生物粒子于专门的培养基上；而沉降菌测试方法，是采用直径为90mm的培养皿，在采样点上利用自然沉降原理30min进行采样。把采样后的基片经过恒温箱内37℃、48h的培养生成菌落后进行计数。使用的采样器皿和培养液必须进行消毒灭菌处理，采样点可均匀布置或取代表性地点布置。浮游菌法采样点数可与测定空气洁净度测点数相同。采样时间应根据空气中微生物浓度来决定。沉降菌法的少培养皿数应符合《通风与空调工程施工质量验收规范》GB 50243-2002的规定。
微生物检测前，洁净室必须处于正常运转状态。其温湿度、风量、风压及风速须控制在规定值内；被测试的洁净室已消过毒，测试人员不得超过2人，须穿洁净工作服。采样前，净化空调系统正常运行时间：对于单向流洁净室（ISO 5级）不得少于10min；对于非单向流洁净室不得少于30min。工作区采样点位置距地面0.8～1.5m，根据需要可在关键部位增加采样点。
1、检测方法
（1）沉降菌测试方法
1）把直径90mm注入培养基的平皿放在测点处，开盖暴露30min后，用手指轻推搭在培养皿边上的皿盖，将其盖好，放入培养皿容器中。若培养皿放置密度较大，在盖盖时应先盖近处、后盖远处的培养皿。以防盖盖操作造成对培养皿的污染。
2）把培养皿放入37℃的恒温箱内培养48h，然后用肉眼计菌落数（CFU），再用放大镜检查是否有遗漏。
（2）浮游菌测试方法
1）对采样器、培养皿进行严格消毒，采样口及采样管在使用前须高温灭菌。
2）测试人员应穿洁净工作服。
3）开动真空泵抽气，时间不少于5min，使仪器中的残余消毒剂蒸发，然后调好流量及转盘转速。
4）关闭真空泵，放入培养皿（双手须用消毒剂消毒），盖好盖子后调节采样器。
5）置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵，根据采样量选定采样时间。
6）全部采样结束后，将培养皿放入37℃恒温箱中培养48h，然后用肉眼计菌落数（CFU），再用放大镜检查是否有遗漏。
2、合格标准
计算被测洁净室的浮游菌平均浓度
C=被测洁净室总菌落数（CFU）/总采样量（m³）
在生物洁净室中，药品、食品、生物制品的生产环境所要求的的浮游菌菌落数及洁净度由相关规范给出，由C值来评定生物洁净室是否达标，若C值≤规定浮游菌菌落数，则达标。
沉降菌的平均菌落数：M=M₁+M₂+…+Mⁿ/n
式中，M为被测洁净室沉降菌平均菌落数（CFU/皿）
M_1、M_2、…Mⁿ为1号、2号、…、n号培养皿的菌落数
n为培养皿总数。
若M≤规范或工艺要求的沉降菌菌落数，则被测洁净室的微生物达到规定标准。否则应查找原因，进行消毒灭菌，规范测试操作，重新测试。