空气净化系统验证--洁净度的测定

验证通常是由安装确认（IQ）、运行确认（OQ）、性能确认（PQ）组成的。其中仪器仪表的校准可以归属于安装确认，也可以单独成为一个组成部分，性能确认是做后的判断。在生产或工艺验证中，性能确认是检验该工艺过程的结果；在生产环境验证中，性能确认是对空气净化系统是否能达到规定的洁净度做出判断，即合格还是不合格，因此性能确认也就是常规意义上或狭义上的“验证”，也就是说，平时所做的不包括安装确认及运行确认的验证实际上就是“性能确认”。在空气净化系统验证中，为了不引起误解，将性能确认称为“洁净度测定”。医药工业洁净室的洁净度包括悬浮粒子和微生物两个方面，因此洁净度的测定主要进行悬浮粒子和微生物的测定。
1、悬浮粒子测定
悬浮粒子的测定可参见国家标准GB/T 16292--2010《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》（以下简称《粒子测试方法》），要点归纳如下：
（1）悬浮粒子的测定方法
主要有显微镜法及自动粒子计数法。
①显微镜法。显微镜法是用抽气泵抽取洁净室内的空气，把在测定用的滤膜表面上捕集到的粒径中大于5um的粒子用显微镜计数的方法。用显微镜法测定的直径为粒子的大直径。
②自动粒子计数法。自动粒子计数法是把洁净室中粒径大于0.5um的粒子，按悬浮状态连续计数的方法。在自动粒子计数法中规定悬浮粒子的粒径等于标准粒子光散射量的球的相当直径。自动粒子计数器为了保持其特性，需定期用聚苯乙烯胶乳进行脉冲校准及流量校准。
（2）悬浮粒子洁净度监测
悬浮粒子洁净度监测的采样点数目及其布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置。一般对于高效过滤器装在末端的空气净化系统及层流罩，只需在工作区（离地0.7～1m处）设置测点即可；而高效过滤器装在空调器内及末端为亚高效过滤器（效率≥95%）的空气净化系统，除在工作区设置测点外，还需在每个送风口处（离开风口约0.3m）设置一个测点。
悬浮粒子洁净度测定的小采样量和少采样点数目参见《粒子测试方法》的规定。
（3）悬浮粒子洁净度级别的结果判定
结果评定参见《粒子测试方法》规定的两个条件。需要说明的是，《粒子测试方法》的标准未说明是日常监测还是验证。一般来说，验证要求应严一些，它是根据动、静比来确定合格标准的。测试状态有静态和动态测试两种。
①静态测试是在洁净室（或洁净区）空气净化系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，在洁净室（或洁净区）内没有生产人员的情况下进行测试。
②动态测试是在洁净室（或洁净区）已处于正常生产状态下进行测试。
2、微生物测定
微生物测定的目的是确定浮游的生物微粒浓度和生物微粒沉降密度，以此来判断洁净室是否达到规定的洁净度。因此微生物测定有测定浮游菌和测定沉降菌两种方法。
细菌通常肉眼看不见，可将它们采集或沉降到培养基中培养。细菌培养时，由一个或几个细菌繁殖而成的一细菌团称为菌落形成单元数（CFU），也称菌落数。浮游菌用计数浓度表示（CFU/L或CFU/m3），沉降菌用沉降浓度表示［（CFU/（皿.min）］。
浮游菌与沉降菌的关系存在着以下近似公式：
Ng=NV_sFT
式中，Ng是在F面积上的细菌沉降数，CFU
    N是在空气中的浮游菌浓度，CFU/cm³
    V_{s是含菌粒子沉降速度，cm/s
    F是沉降面积，}cm^{2
    T是沉降时间，s
（1）浮游菌的测定
浮游菌的测定可以参照国家标准GB/T 16293-2010}《医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》（以下简称《浮游菌测试方法》）。重点归纳如下：
①浮游菌测试是通过收集悬浮在空气中的生物性微粒，通过专门的培养基，在适应的生长条件下，让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境中单位体积空气中菌落数的多少。
②浮游菌测定需有专门的采样器、真空抽气泵等设备，浮游菌采样器常用撞击法中的狭缝式采样器。
③浮游菌采样器必须要有流量计和定时器，并严格按仪器说明书的要求定期进行校验和操作。
④浮游菌测定的采样点及数目与悬浮粒子测定相同，即在同悬粒子测定时相同的测定点采样。
⑤浮游菌洁净度测定的小采样量和少采样点数目参见《浮游菌测试方法》的规定。
⑥浮游菌洁净度的结果评定参见《浮游菌测试方法》的规定。
（2）沉降菌的测定
沉降菌是用暴露法收集降落在培养皿中的生物性微粒，加以培养繁殖后计数得到的。沉降菌的测定可参见国家标准GB/T 16294-2010《医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试方法》（以下简称《沉降菌测试方法》）。重点归纳如下：
①沉降菌测定的设备主要是90mm*150mm玻璃培养皿和各种培养基。
②沉降菌测定的培养皿应布置在有代表性的地方和气流扰动小的地方，其少采样点数目见下表：

在满足少测点数的同时，还要满足少培养皿数，如下表所示。不论面积大小、作为一个被测对象，都应该满足这个要求。

③采样方法及培养。将培养皿按要求放置后，打开平皿盖，使培养基表面暴露30min后，将平皿盖盖上，然后在30～35℃的条件下培养48h计数。
④结果计算：M=ΣM_i/n
式中，M为平均菌落数，CFU
      M_i为1,2,3，…，n号平皿菌落数
      n为平皿总数
（3）物体表面微生物测试
此测试的目的是确定物体表面微生物污染的程度。一般有棉签间接取样后培养和直接接触法取样两种测试方法。
接触法使用罗达克培养皿，测试方法是将培养皿直接接触需采样的物体表面，培养后长出菌落。这个测试技术适用于平整光滑的表面。
这项测试应在去污染程序后进行。但琼脂培养基留在物体表面上终究是个问题。因此，采样后应马上进行去污染。每只培养皿需做好标志，指明采样点的确切位置。应注意房间里的标志供现在和将来参考。