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一、监测依据
1、《中华人民共和国国家标准（医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法）》GB/T 16294-2010。
2、《药品生产质量管理规范》（2010年修订）。
二、检测原理
沉降菌的测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
三、监测要求
1、测试条件
（1）温度和相对湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18～26℃，相对湿度在45%～65%为宜），同时还应满足测试仪器的使用范围。
（2）室内压差、送风量或风速应符合要求。
（3）高效过滤器的泄漏测试应符合要求。
2、测试状态
（1）沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温度、湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。
（2）沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。
（3）测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
3、测试时间
（1）静态a：单向流洁净室（区）在空气净化系统正常运行10min后开始，非单向流洁净室（区）在空气净化系统正常运行30min后开始。
（2）静态b：单向流洁净室（区）在生产操作人员撤离现场自净10min后开始；非单向流洁净室（区）在生产操作人员撤离现场，自净20min后开始。
（3）在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。
备注：静态a指洁净室（区）在空气净化系统已经安装完毕且功能完备的情况下，生产工艺设备已安装、洁净室（区）内没有生产人员的状态。
静态b指洁净室（区）在生产操作全部结束，生产操作人员撤离现场并经过20min自净后的状态。
四、采样
1、最少采样点数目的确定
根据洁净室（区）面积大小和洁净级别要求不同确定最少采样点数目，按国家标准要求，采样在满足最少采样点数的同时还应满足最少培养皿数。不同级别的洁净室（区）最少采样点数可按下表确定：
备注：表中的面积对于单向流洁净室指的是送风面积，对于非单向流洁净室指的是房间面积。
最少培养皿数按下表确定：
2、采样点的布置
（1）工作区测试点位置离地0.8～1.5m。
（2）可在关键设备或关键工作活动范围处增加测试点。
（3）采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中或稀疏。
3、测试步骤
（1）测试前，用75%乙醇棉球或0.1%新洁尔灭溶液擦拭培养皿外表面后，将培养皿放入传递窗内杀菌至少30min。
（2）将已制备好的培养基平皿面朝上按采样点布置图由内至外逐个放置，逐一打开皿盖，把培养皿盖朝下斜靠在培养皿边缘，使培养皿表面暴露在空气中1h以上，但不大于4h，再讲培养皿盖好后倒置。
（3）静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，单个沉降碟的暴露时间可以少于4h，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测，并积累计数，直至监测时间累计达到4h。
采样注意事项：
（1）测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
（2）静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
（3）对于单向流洁净室（区）或送风口，采样器采样口朝向应正对气流方向；对于非单向流洁净室（区），采样口向上。
（4）布置采样点时，至少应尽量避开尘粒较集中的回风口。
（5）采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少走动。
（6）应采取一切措施防止采样过程的污染和其它可能对样本的污染。
五、培养
（1）全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，注意观察菌落生长情况。
（2）采用大豆酪蛋白琼脂培养基配制的培养皿经采样后，在30～35℃培养箱中培养，时间不少于2天；采用沙氏培养基配制的培养基经采样后，在20～25℃培养箱中培养，时间不少于5天。
（3）每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。
六、菌落计数
（1）用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查有无遗漏。
（2）若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不能分辨时，以1个菌落计数。
七、计算结果
用计数方法得出各个培养皿的菌落数之和，每个检测点的沉降菌平均菌落数用下式计算：
式中，
为平均菌落数
M1为1号培养皿菌落数
M2为2号培养皿菌落数
Mn为n号培养皿菌落数
n为培养皿总数
八、结果与判定
每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定评定标准中的界限。在静态测试时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。不同级别洁净室（区）沉降菌技术指标见下表所示：
九、记录
洁净室（区）沉降菌的监测应填写记录，监测报告应包含以下内容：
（1）测试者的名称和地址，测试日期。
（2）测试依据。
（3）被测洁净室（区）的平面布置。
（4）有关测试仪器及其测试方法的描述。
（5）测试结果，包括所有统计计算资料。
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